化学试剂在贮存过程中是否会发生变质,取决于内外两个方面的因素,内因是试剂本身化学结构所决定的理化性质;外因则是试剂所处的环境条件。要做到合理保管,一要了解试剂结构与性质间关系,二要创造适应试剂贮存的外部环境。
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检测人员在使用新开封试剂时,应对其质量进行检查。任何物理性状明显改变、出现沉淀、变色等的试剂不得使用。检测人员严格按照检测方法要求使用或配制试剂,试剂配制时及时填写《试剂配制记录》,试剂配制人员要有签名,并填写“试剂标识”加贴在装试剂的容器上。质量监督员对试剂的使用过程进行监督检查,保证检测人员正确使用试剂。
生化试剂盒通过化学反应/酶促反应或物质结构特点测定样本中物质含量或酶活;所用仪器一般为分光光度计和酶标仪,两者的测定原理都是朗伯比耳定律:A=kbc,即当适当波长的一束平行单色光照射固定浓度均匀溶液时,其吸光度与光通过的液层厚度成正比。土壤、水质、动植物组织、血清、细胞细菌、食品等样本均可以进行测定。
RNase酶非常稳定,是导致RNA降解最主要的物质。它在一些极端的条件可以暂时失活,但限制因素去除后又迅速复性。用常规的高温高压蒸气灭菌方法和蛋白抑制剂不能使所有的RNase完全失活。为了获得高质量的真核细胞mRNA,必须使用RNA酶的抑制剂或采用下述的破碎细胞和灭活RNA酶同步进行的方法,最大限度地降低细胞破碎过程中所释放的RNA酶的活性。
苏木素-伊红(hematoxylin/eosin)染色法是一种用普通光学显微镜观察凋亡细胞形态学特征的简便方法。细胞凋亡时主要的形态学变化为细胞体积变小,胞质浓缩,染色质高度凝集、边缘化,呈新月状,随后染色质裂解成大小不等的块状,核膜裂解,细胞以类似胞吐的方式形成凋亡小体。苏木素容易被氧化,其氧化产物苏木红是真正的染料,苏木红与铝结合形成一种带正电荷的蓝色色精,呈碱性。带负电荷的脱氧核糖核酸根和带正电荷的蓝色色精进行极性吸附而完成细胞核的染色。伊红可分为几种,如伊红Y和伊红B等。伊红Y是一种酸性红色胞质性染料,对细胞质、肌纤维及胶原纤维具有着色性,呈粉红色。细胞经HE染色后,细胞核呈蓝紫色,细胞质呈粉红色,根据凋亡细胞的形态学特征可观察细胞凋亡的情况。