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资料信息
  • 28 2024-05
    PCR失败的原因及改善方法

    普通PCR所用的一对引物中有一个引物加多了,为正常的三倍只要引物特异性比较好,那么不会产生大的影响。如果恰巧是加多的这条引物不是很特异的话,也许会扩出来非特异带。

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  • 27 2024-05
    慢病毒感染目的细胞实验步骤

    培养细胞至对数生长期,细胞以胰酶消化计数后,用细胞计数测出细胞密度,每孔接种 5×104 个细胞,添加细胞培养液至 500µL。通常情况下,该接种量的 H1299 或 293T 细胞在感染后第 3 天可生长至 80%-90% 融合度。(接种目的细胞时,请根据细胞的实际生长速度调整接种量,使目的细胞感染后第 3 天生长至 80%-90% 融合度)

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  • 24 2024-05
    WesternBlot原理、显色分类及操作步骤

    与Southern或Northern杂交方法类似,但WesternBlot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。既可以定性,又可以半定量的Western是初步鉴定蛋白质最方便也是最通用的方法。

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  • 22 2024-05
    细菌的芽孢染色(spore staining)实验方法

    细菌的芽胞具有厚而致密的壁,透性低,不易着色,若用一般染色法只能使菌体着色而芽胞不着色(芽孢呈无色透明状)。芽孢染色法就是根据芽孢既难以染色而一旦染上色后又难以脱色这一特点而设计的。所有的芽孢染色法都基于同一个原则:除了用着色力强的染料外,还需要加热,以促进芽孢着色。当染芽孢时,菌体也会着色,然后水洗,芽孢染上的颜色难以渗出,而菌体会脱色。然后用对比度强的染料对菌体复染,使菌体和芽孢呈现出不同的颜色,因而能更明显地衬托出芽孢,便于观察。

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  • 21 2024-05
    牛血清白蛋白分类与作用介绍

    牛血清白蛋白是血液中的主要成分(38g/100ml),分子量68kD,等电点4.8,含氮量16%,含糖量0.08%,仅含已糖和已糖胺,含脂量只有0.2%。白蛋白由581个氨基酸残基组成,其中35个半胱氨酸组成17个二硫键,在肽链的第34位有一自由巯基。白蛋白可与多种阳离子、阴离子和其他小分子物质结合。牛血清蛋白溶液可以作为测量蛋白质含量的标准曲线用。

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  • 20 2024-05
    酸碱滴定实验步骤+注意事项

    注意观察液滴落点周围溶液颜色变化。开始时应边摇边滴,滴定速度可稍快(每秒3~4滴为宜),但是不要形成水流。接近终点时应改为加一滴,摇几下,最后,毎加半滴,即摇动锥形瓶,直至溶液出现明显的颜色变化,准确到达终点为止。

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  • 17 2024-05
  • 16 2024-05
    简述质粒载体基本信息与应具备的条件

    自然界中,质粒是在营养充足时出现的,它在结构、大小、复制方式,每个细菌的拷贝数,在不同的细菌体内的繁殖力不同,在菌种之间的转移力等方面都会变化,可能最重要的是质粒所携带的特征的改变。大多数原核生物的质粒是双链环状的DNA分子;但是无论是在革兰氏阳性还是阴性菌体内都可以发现线状质粒。质粒大小变化很大,可从几个到数百个kb。
     

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  • 15 2024-05
    【细胞培养实验】贴壁细胞与悬浮细胞的培养差异

    由于贴壁细胞贴壁生长,接触抑制,长满一瓶后贴壁较紧,不易取出。这时必须用胰蛋白酶或者胶原蛋白酶处理,使其分散开后取出,然后在放入新的培养瓶中培养。

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  • 14 2024-05
    细胞冻存原理+操作步骤+注意事项

    当细胞所处温度低于0°C时,细胞脱水,细胞中可溶性物质浓度升高,并在细胞内形成冰晶,冰晶的大小对细胞的影响是不同的,大冰晶容易造成细胞膜、细胞器的损伤和破裂,故造成复苏出来的细胞存活率、状态等与冻存前的状态相差甚远。因此,我们在冻存细胞的时候会采取两个措施,一加入低温保护剂,二,慢冻细胞。

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